《灵芝的栽培与实验研究》 | 第一篇 灵芝的栽培 3 原种和栽培种的制作

灵芝原种是由灵芝母种转接到天然基质（棉籽壳，麦麸等制作的培养料）上经扩大培养而成的菌种，是灵芝菌丝体和天然基质的混合体。原种的作用是用于繁殖栽培种。而灵芝栽培种是由灵芝原种转接到天然培养基上扩大培养的菌种，也是灵芝菌丝体和天然基质的混合体，直接用于灵芝栽培的菌种。

3.1培养基的选择与配方

3.1.1原种培养基的配方

原种与栽培种培养基配方一般根据当地的实际情况选用合适的栽培材料，常用的灵芝原种培养基配方为：

①阔叶树木屑78%，玉米粉10%，麸皮10%，蔗糖1%，石膏粉1%。

②白桦木屑77%，麸皮20%，食糖2%，石膏1%。

③棉籽壳90%，麸皮7%，石膏2%，磷肥1%。

④棉籽壳60%，木屑30%，麸皮7%，石膏2%，磷肥1%。

3.1.2栽培种（代料栽培袋）培养基配方

木屑加麸皮或玉米粉是传统灵芝栽培培养基的基本原料，近几年来，栽培主料有所变化，棉籽壳添加麸皮或玉米粉成为大规模种植的首选。这两种主料相比，木屑栽培，产量低、出菇慢、菌盖小，但组织致密、易造型；棉籽壳栽培，产量高、出菇快、菌盖大，但质地疏松。其他栽培料也不少，如酒糟、玉米芯、花生壳等。合理搭配原料，都可获得优质高产灵芝。生产上选用栽培料会考虑原料来源广，成本低、菌丝生长壮、出芝率高等特点，同时栽培料配方要简易，且便于在农村或城镇推广使用。以下介绍各地生产中用到过的栽培配方[1-7]。

①木屑70%，麸皮28%，糖1%，石膏1%。

②木屑73%，玉米粉5%，麸皮20%，糖1%，石膏粉1%。

③木屑39%，棉籽壳39%，玉米粉20%，糖1%，石膏粉1%。

④桦木屑55%，落叶松木屑25%，石膏1%，豆饼粉2%，麸皮17%。

⑤白桦木屑82%，麸皮15%，石膏1%，豆饼粉2%。

⑥杨树叶85%，米糠15%（或加麸皮），石膏粉1%。

⑦木屑69%，玉米芯5%，麸皮24.5%，石膏粉1%，碳酸钙0.5%。

⑧玉米芯粉74.5%，麦麸或米糠24.5%，石膏粉0.5%，碳酸钙0.5%。

⑨麦秸粉45%，杂木屑39%，麸皮（米糠）15%，石膏粉1%。

⑩麦秸粉45%，棉籽皮45%，麸皮10%，石膏粉1%。

⑪棉籽壳83%，玉米粉15%，糖1%，石膏粉1%。

⑫棉籽壳75%，麸皮20%，玉米粉2%，糖1%，磷肥1%，石膏粉1%。

⑬鲜酒糟70%，木屑10%，玉米粉17%，糖1%，过磷酸钙1%，生石灰1%。

⑭花生壳或豆秸78%，麦麸或玉米粉20%，蔗糖1%，石膏粉1%。

注：以木材为生长基质的菌类，它们分解纤维素、木质素的能力较强，可用段木或木屑作培养料进行栽培。但树种的木屑不是都可以用来栽培灵芝。含有松脂、精油、醇、醚等杀菌物质的松、柏、杉等针叶树以及含有少量芳香性杀菌物质的樟科、安息香料等少数阔叶树种的木屑，一般是不能直接用来栽培灵芝的。一般的阔叶树种如柞、柳、榆、械、杨、槐、桑、桦、枫、构、椿、栎、桃、梨、苹果、苦悚、悬铃木等的枝条和木屑，都适宜栽培食用菌。

近年来经过不少单位试验，松、柏、杉等针叶树的木屑只要经过预处理，还是可以用的。预处理的方法是：将经过暴晒2~3d的新鲜干燥的松、柏、杉等树的木屑盛在容器内，注入沸水浸泡，并加入1%~2%的石灰粉拌匀，覆盖旧麻袋保温。浸泡1~2d，控水后再用清水冲洗，基本上达到无松油味和碱味后，摊在塑料薄膜上晒干，促使木屑中残留的有害物质进一步挥发。然后适量喷水，使含水量达到60%~70%，pH值为7~7.5，再将四周塑料薄膜卷包盖严，使其发酵。待料温达到65~69℃时，保持2~3d，然后散开堆料，晾凉后就可使用。也可用堆置发酵的方法，待堆温升高到60~70℃时，维持3~4d后翻堆，将四周的翻至中间，再发酵一次，就可使用。一般松、柏、杉木屑处理后，用于栽培食用菌时，都要加入10%~20%的麸皮或米糠，还要加入1%~2%的过磷酸钙。

3.2原种与栽培种生产工艺流程

3.2.1原种生产 工艺流程

配料→拌料分装→灭菌→冷却→接种（母种）→培养管理→质量检验→原种。

在27~29℃下培养25d左右，原种可以长满瓶中培养基（完全吃料）。

3.2.2栽培种生产工艺流程

配料→拌料装袋→灭菌→冷却→接种（原种）→培养管理→质量检验→栽培种。

在27~29℃下培养18~20d，栽培种可以长满整个培养袋（完全吃料）。

3.3原种和栽培种生产技术要点

3.3.1配料

参考上述培养基配方，按照廉价易得和节约资源的原则选定原种或栽培种培养基配方。栽培种木屑培养基菌袋制作，进入冬季，最迟不过第二年4月中下旬之前，按照栽培种不同配方配量培养基，拌匀后人工或机器装袋。

3.3.2拌料分装

除了以上所需要的原料外，还需要按照总量的1%，填入杀菌用的生石灰。按配方称取原辅料，先将量大的干料搅拌均匀，再加入量少的其他辅料，然后逐步加水（可溶性成分直接溶于水中）继续搅拌，先干拌，再湿拌，要求原辅料均匀，干湿均匀，至培养基含水量达到要求时（通常控制含水量为60%~65%），以用力握时指缝间有水但不滴出即可分装。为了保证菌种质量，生产原种（二级种）当用无色或浅色透明的750mL菌种瓶作为菌种容器。生产灵芝栽培种（三级种）可用15cm×30cm×0.055mm（长×宽×厚度）的PE袋（适合常压灭菌）或者PP袋（可以高压灭菌）作为菌种容器。

装瓶时，一边将料灌入瓶中，一边用手捏着瓶颈不断振动，直至将料装至瓶口。用合适的工具将瓶表面的物料整平，压紧到瓶肩处，或直接用手握捶直接把料弄平，松紧要合适，过紧瓶内空气少，影响菌丝生长，过松虽然发菌快，但菌丝少，且易干缩；瓶口与料面留出30mm左右间距，装料好后若瓶口有培养基质则应一块布抹去，以防杂菌侵入，封好瓶口；如装塑料袋则应用力均匀，轻拿轻放，避免塑料袋破损。装袋塑料袋一般为低压聚乙烯或聚丙烯塑料袋，袋长33~55cm、宽17~30cm，装干料1~1.5kg。装料之前要用水对栽培袋做密封试验，使用密封好的袋。破损的袋会造成杂菌污染。装袋时将栽培袋底角折叠成方形，人工装料要一边装一边压实，培养料应上面稍紧，下面稍松，松紧度适当。将料装入袋内3/5处即可。装料后套上纸环，用塑料将环包严，扎紧袋口，留好接种口以便接种，在接种口上塞好棉塞。装好料的瓶（袋）称为料瓶（料袋）。

3.3.3灭菌

灵芝生产中所涉及的原料，用水，设备，空气等都有大量的真菌、细菌、放线菌、病毒等微生物和虫害，它们无时无刻不在与灵芝争夺养料和侵害灵芝，这些杂菌和病虫害给灵芝生产造成危害和损失，所以，必须严格地消毒灭菌。从拌料装袋到灭菌应在6h内完成，防止出现灭菌死角。将料瓶（袋）装入灭菌锅内，灭菌方法有两种：一是高压蒸汽灭菌，二是常压蒸汽灭菌。少量原种、栽培种可以用自动灭菌锅，或手提式灭菌锅灭菌，但每次灭菌数量有限，不适合工厂大量使用，采用0.14MPa，126℃灭菌；如果生产大量的原种、栽培种，就要用大型灭菌锅灭菌。常压灭菌一定掌握好烧火的火候，预热升温阶段，火要尽可能地大一些，使温度尽快升到100℃。达到100℃后，要保证蒸锅内蒸气充足，使蒸锅气孔连续不断地喷出蒸气，这样就能保证蒸气到达培养料堆各个部位，不出现灭菌死角。当温度上升到100℃时，保持8~10h，才能达到消毒灭菌的目的。常压蒸汽灭菌污染率较高，生产菌种最好使用高压灭菌锅，高压灭菌在0.015MPa压力下保持2h。

3.3.4冷却

灭菌后的料瓶（袋）既可以在专用冷却室内冷却，也可以在接种室内冷却。冷却场地必须提前24h进行消毒处理。当培养料温度下降至30℃以下（明显低于手心温度时），方可进行接种。而接种之前应进行无菌培养试验，检测灭菌效果。

3.3.5接种

按照无菌操作要求，将母种或原种移接到经过灭菌的新鲜培养基上，称为接种。原种和栽培种的接种方法类似，但不同的是原种接入母种，栽培种接入原种。由于打开试管或菌种瓶就可能引起容器内部被环境中其他微生物污染，因此接种的所有操作均应在接种箱（室）或超净工作台进行。接种箱与接种空间应在使用前进行消毒处理。对整个接种环境用福尔马林、高锰酸钾或来苏儿原液进行彻底消毒；在各项接种工作准备完毕后，接种之前4h，每立方米空间用烟雾消毒剂4g，再进行第二次消毒。在母种接原种时，在无菌条件下，将接种针放在火焰上方充分灼烧、冷却后，在酒精灯火焰附近拔开试管棉塞，钩取一小块带培养基母种，可将母种斜面横切成6~8段，弃去先端，其余每段连同培养基一起接入原种培养基上。

原种移接栽培种时可在无菌操作室或无菌操作台上进行，将扁形接种钩或接种铲在火焰上方充分灼烧、冷却后，在酒精灯火焰附近拔开试管棉塞，先弃去原种靠近瓶口3cm左右的表层原种以减少栽培种的杂菌污染。再将适量下层菌种移接到栽培种培养料的表面，一瓶原种可以转接栽培种50~60瓶。潘湖生等探索出一条简便的提高菌袋成活率的方法：灵芝栽培种选用麦粒做培养基，在菌种发菌刚长满时采用帐篷式开放室外接种。操作方法是：将灭好菌的菌袋叠码堆放在宽4m、厚0.008cm的厚膜中央，待菌袋全部堆好后，用厚膜覆盖密封菌堆，盖膜与地膜接口处用沙袋压紧，防止消毒时消毒剂气味溢出，每1000包菌袋用450~500g气雾消毒剂熏蒸2.5h后进行接种。采用麦粒菌种比棉籽壳或木屑菌种萌发快，吃料快也有利于降低菌袋接种污染率，同时这种接种方法既可免受室内密闭接种消毒剂的刺激，又比接种箱接种效率高，接种成活率与接种箱接种效果一样好[30]。灵芝接种成功是提高菌袋成活率的关键，也是提高栽培产量的关键。

3.3.6培养

原种及栽培种接种后置于培养室培养、将接好种的菌瓶（袋）移至恒温室或培养室培养，移动前打扫培养室，保持环境整洁，并提前消毒处理才能移入菌瓶（袋）。维持培养室温度在25℃左右，空气相对湿度为60%~70%。避光，坚持通风换气。菌种培养前期，每隔2~3d严格检查一次，菌丝覆盖培养基表面后，每隔7~10d检查一次。如在瓶壁、培养基内或接种块发现红、绿、黄、黑色等斑点，说明有红色链孢霉、青霉、曲霉或根霉等杂菌污染，应予以淘汰，如检查时间间隔过长，杂菌菌落可能被生长旺盛的食用菌菌丝体掩盖，造成隐形污染。塑料袋制种因体积大，在培养架上放置时切勿挤压，且不宜翻动太频繁，以免菌丝损伤或塑料袋破损。培养室内的培养架之间用木条相互支撑，以免发生倾倒事故。在适宜环境条件下，一般经过20~40d的培养，菌丝即可扩展蔓延至整个培养料，再经过7~10d的培养，即可用于转接栽培种或用于生产。制备的菌种如果暂时不用，可在凉爽干燥、通风、避光、清洁的室内短期存放，以确保菌种的质量。即使是低温条件下保存，也不宜存放太久，以防菌种老化而活力下降，导致接种后萌发缓慢，而且容易感染杂菌。

3.4 栽培种（段木栽培种）制作

3.4.1段木的选择与处理

不同树种栽培灵芝对灵芝子实体外表色泽有明显影响：白栎、青冈、漆树、拟赤杨栽培的灵芝表面光泽性好，杨梅、甜槠、枫香栽培的灵芝表面光泽性较差。其中，以壳斗科树种较理想，特别是青冈属、栲属和栎属树种为最好。除此之外，杜英科、金缕梅科等树种也很适合灵芝栽培[8]。实践证明供灵芝栽培的树种约77种，分属20科42属。栽培效果较理想的树种，其木材学特征是：树皮较厚，形成层发达，不易与木质部剥离；木材容重比较大，材质较硬实；边材发达或不显心材，早材率高；木射线发达或具宽木射线；导管丰富或为大型导管材。树木直径要求6~ 20℃m，长30℃m为宜，芝树的砍伐期一般安排在生产前半个月，也可边砍伐、边截断，但不必剥皮，锯成长为1m的段木，边装袋灭菌，水分不足将抑制子实体发生。如果树种含水率较高，则要堆积干燥，直至用木楔打进段木内，不见流出树液时，便可接种。不同树种基质栽培灵芝，对生物转化速度和转化率有较大差别，枫香栽培灵芝前期（第一潮）生物量大，生物转化速度快，而杨梅生物转化速度慢，第一潮灵芝的转化不到二潮的40%，第二潮生物转化占60%以上，主要的生物转化在第二潮[9]。

3.4.2段木规格及数量

1立方米段木数量依段木直径与段木长度而变。熟料栽培灵芝的段木长度一般为28cm左右。直径10cm、长度28cm的短段木大约450段；直径12cm、长度28cm的短段木大约300段；直径14cm、28cm长的短段木大约220段；直径16cm、28cm长的短段木大约170段。每亩地（1亩≈666.7平方米）可以摆放20平方米段木。每立方米段木当年约产干灵芝20kg（一般可出芝2年）。

每立方米段木约需菌种量100袋（15cm×55cm），每亩需PE熟料袋200kg。

3.4.3段木栽培袋制作

木段通过人为手段将木段含水量控制到40%左右，装入聚乙烯折角菌袋，用细绳将长短一致的小段木捆成稍小于熟料袋的段木捆。打紧捆，使捆内的段木之间尽可能紧密接触，以利于灵芝菌丝体蔓延生长。捆的两端要保持平整，并剔除捆四周枝权，以免刺破熟料袋。然后装袋，两头用活结扎紧。如果两头用2.8~3.5cm的无棉熟料颈圈套口，既可以避免袋内出“黄水”，又利于在菌棒发育后供氧。袋装短段木可以采用常压灭菌，置100℃，保持48h。

3.4.4接种

选择密封性好、干燥、清洁、墙壁与地面光洁的房间作为冷却室或者接种室。将冷却后的短段木熟料筒及预先选择、消毒过的菌种袋和接种工具一道搬入接种室，用气雾消毒盒熏蒸消毒。在灭菌段木移植冷却室或者接种室的过程中，必须用塑料薄膜覆盖熟料袋（袋装短段木），防止受灰尘污染，避免杂菌感染。段木移植冷却室后，先按每立方米空间用烟雾消毒剂（二氯异氰尿酸钠）4g，消毒过夜；第二次消毒在各项接种工作准备完成后，接种前4h，立方米空间用烟雾消毒剂4g，消毒过夜。段木消毒之后，待袋中段木（培养料）温度降到30℃左右（低于手心温度）时即可以开始接种。一般按每袋三级种（2kg）接5根段木（1：5）的接种量接种。菌种含水量略湿为好，65%~70%湿度，菌丝洁白、健壮浓密、无杂菌污染、无褐色菌膜，生长旺盛的菌种，菌龄最好不要超过40d。段木接种时，先将塑料袋表层的菌种皮弃之，采用双头接种法。两人配合，一人将熟料扎口绳解开，另一人在酒精火焰口附近，将捣成花生仁大小的菌种撒入，并立即封口，扎紧。另一端再用同样的方法接种，周而复始。随后分层堆放在层架上。接种过程应尽可能缩短开袋时间。加大接种量，封住裁断面，减少污染率。并使菌丝沿着短段木的木射线，迅速蔓延。接种后的段木称为菌棒。

3.4.5菌棒质量鉴定指标与方法

在温度适宜的情况下，一般培养25d左右菌丝便可长满整个段木表面。

短段木外表已全部发满灵芝菌丝体后，为让菌丝发透，从营养生长向出芝生长转变，还需继续培养，使灵芝菌丝体达到生理成熟。在此期间，可在弱光环境中培养20d以上。当菌袋内菌棒之间菌丝连接紧密难以分开，出现部分红褐色菌被，轻压菌棒微软有弹性，劈开菌棒其木质部呈浅黄色或米黄色，或者部分芝木有芝芽形成，表示菌棒发菌充分，已经达到生理成熟，可以进行脱袋覆土的栽培出芝管理。

3.4.6栽培季节

遇雨季或雨天，要注意排水，避免场地积水。此外，还要在栽培场周围撒一圈拌有灭蚁灵的毒土，诱杀白蚁，防止白蚁侵害灵芝菌丝体。翌年清明节日后，当气温升至25℃左右，可取出数根段木检查，揭开树皮盖或木楔，见孔穴周围已长成茶褐色，或已长出芝蕾，段木两端有白色菌丝或浅褐色菌膜并可嗅到灵芝菌丝的特殊气味，显示菌丝已成熟。立即将段木挖出，截成长17~22cm的小段木。然后，将其斜埋入酸性含沙砾的土壤中，上端露出地面约3cm，且覆盖杂草遮阴，隔数日洒水1次，保持土壤湿润，经7~10d开始长出芝蕾。在生长芝蕾时期，栽培场的空气相对湿度保持在90%左右。

太干太湿，均会导致芝蕾死亡。在适宜的温度、湿度条件下培养，芝蕾生长迅速，先长出菌柄，接着再长出菌盖。约经2个月即可采收。

3.5菌种的感染与控制

灵芝菌种的生产是整个灵芝生产过程中的首要关键，菌种质量的好坏直接关系到灵芝的产量和品质。纯种的生产与制备，其操作技术并不是很难，但整个过程中必须特别注意杂菌及其他微生物的污染，一旦菌种感染杂菌，会影响整批灵芝的栽培，往往造成很大的经济损失[10-11]。因此必须从各方面对杂菌进行预防与控制，以利于提高灵芝菌种的正品率。

3.5.1灵芝菌种感染杂菌的原因分析

灵芝菌种制作的每个环节都可能感染杂菌，一为拌料时可能发生杂菌污染，如培养料不新鲜、湿度不合适，或拌料不均匀，都易发生杂菌；二为灭菌不彻底引起杂菌污染，如灭菌时间不够，灭菌温度不够，或灭菌过程中透气不良，均可造成灭菌失败，而感染杂菌；三为接种时没有严格无菌操作而引起杂菌污染，如接种工具消毒不严，接种过程动作太慢均易引起杂菌感染；四为接种用的菌种可能本身带杂菌而引发污染；五为菌种培养过程中发生杂菌污染，如菌种培养时没有注意温度、湿度、光线、氧气等环境因素，而引发杂菌侵染。

3.5.2灵芝菌种感染杂菌的控制措施

针对菌种感染的原因，采取相应的控制措施。

①精心拌料：首先，应选择新鲜、无霉变、未经雨水淋湿的木屑或棉壳作原材料，且进行合理的配方。其次，灵活掌握调水，如果培养料基质偏干，颗粒偏细，酸性强，水分调节应偏多，否则就调水少；晴天水分蒸发快，则调水多，雨天应调水少；夏天调水多，冬天可调水少些，总之要做到干湿搅拌均匀，pH值均匀。最后在操作过程中力求快速，动作力求轻便，在地面堆放时最好垫一层麻袋，以防擦破菌袋。灵芝制种一般在高温季节，如果拌料时间过长，培养料易发酸，养分易受到破坏，因此宜尽量快速操作。

②严格进行灭菌：培养料在灭菌前，若封培养料的瓶口是棉塞，则应在上面盖圆弧形的塑料薄膜，防止锅盖上的水蒸气水淋到棉塞上。常压灭菌时，温度上升力求快速，达100℃时再维持8~10h。高压灭菌时，冷气务必排尽，压力上升到1.5千克/平方米时要保持2~3h。灭菌过程中不能随意添加冷水，以免温度突然下降。灭菌结束后，菌瓶（袋）不能马上出锅，须在锅内焖几个小时再出锅，如能焖上一夜则灭菌效果更佳。

③严格挑选菌种：菌种感染杂菌，一般是因原种带杂，接种污染，棉塞湿或塑料袋有微孔。原种带杂菌常由于菌种培养过程中对杂菌检查不严密，菌种菌龄长，培养室暗、不通风、空气湿度大而造成的。为使菌丝快速生长，菌种瓶口通常使用的是棉塞，但棉花是一种隔热性能极好的物质，难以消毒彻底，因而是各种霉菌的良好培养基。刚开始由于棉塞干燥，杂菌孢子不能萌发、长出菌丝，但以后菌种培养过程中因呼吸散发出的水汽被棉塞吸收，使棉塞中心的杂菌孢子逐渐萌发生长，时间一长，杂菌的菌丝就会穿透到棉塞头上，继而产生孢子并掉落到菌种表面。这种情况在培养室黑暗、通风少、湿度大的情况下容易产生。所以，菌种培养时培养室要每隔1~2d通风1次，室内地面要高于室外地面50cm以上，室内湿度不要超过65%（但也不能过分干燥，否则培养基表面会失水，造成菌丝生长不良）。其次被选菌种的菌龄不宜超过两个月。菌龄长的菌种扩大繁殖时应敲破瓶底，从底部接起，近表面的菌种弃去不用。原种菌种表面可每隔2~3d检查1次杂菌，有杂菌污染的应弃去不用。接种用的菌种一定要由专业人员进行认真的挑选，一般要选取洁白、浓密、健壮、生长旺盛的菌丝，接种后则生长迅速，吃料快，不易感染杂菌。

④接种操作的动作要快，接种的环境要清洁，这样就可降低杂菌的感染程度。首先接种前准备要做充足。接种室及接种用的所有工具均要进行严密消毒。灭菌到接种的间隔时间不要太长，最好是在消毒好的培养料还有余温（32~35℃）时接种。接种时先检查棉塞是否打湿，如棉塞湿了必须及时更换无菌棉塞。其次接种过程中，不能离开火焰附近的无菌区，菌种瓶上口要随时靠近酒精灯火焰，棉塞拔下时也要在酒精灯火焰上过一下，动作要迅速，菌种离酒精灯火焰以6~8cm为宜。接种的速度要快，防止杂菌侵入和感染，最好两人合作，一人去棉塞，同时另一人接种，再迅速把棉塞封上。

⑤把好菌丝培养关，为灵芝菌丝生长提供适宜的培养基与环境条件。首先培养基原料选择方面要注意：灵芝对木质素的分解能力很强，为培育菌丝生命力强、不易衰老的菌种，最好选用硬质木屑作为培养原料，用材质较松的木屑作培养原料时菌龄不宜太长。其次在菌丝培养环境方面要注意：培养室温度保持在20~25℃，无光或弱光，湿度为60%~70%，注意室内保持清洁、不阴湿，定时通风，定期清查杂菌，发现被污染的菌种要及时处理。只有严格控制以上5个方面杂菌可能的感染途径，才能制出合格的灵芝菌种。

本章参考文献

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