《宠物人兽共患传染病防控》 | 第二章 宠物人兽共患动物疫病的监测 第二节 动物活体样品的采集及技术要求
样品的采集作为疫病防控的第一步，有至关重要的作用，样品的质量决定检测的结果。
· 禽类活体的采集
（一）喉咽拭子采集
取无菌棉签，插入禽类喉头顺时针、逆时针各转动3圈，取出，插入离心管中［事先加入含有青霉素、链霉素各3000IU的pH值7.2的磷酸盐缓冲液（PBS）］，剪去露出部分，盖紧瓶盖，做好标记。
（二）泄殖腔拭子采集
取无菌棉签，插入禽类泄殖腔顺时针、逆时针转动3圈，取出，插入离心管中（事先加入含有青霉素、链霉素各3000IU的PBS，泄殖腔棉拭子悬液的抗生素浓度应提高5倍），剪去露出部分，盖紧瓶盖，做好标记。
（三）羽毛采集
拔取受检禽类含羽髓的翅羽或身上其他部位大羽，将含有羽髓的羽根部分按编号分别剪下收集于小试管内，于每管内滴加蒸馏水2～3滴（羽髓丰满时也可不加），用玻璃棒将羽根挤压于试管底，使羽髓浸出液流至管口，用滴管将其吸出。
· 犬猫等动物样品的采集
（一）鼻腔拭子、咽拭子采集
应用灭菌的棉拭子采集鼻腔、咽喉或气管内的分泌物，蘸取分泌物后立即将拭子浸入保存液中，密封，低温保存。常用的保存液有pH值7.4的含抗生素的磷酸盐缓冲液、pH值7.2～7.4的灭菌肉汤或30%甘油盐水缓冲液，如准备将待检标本接种组织培养，则保存于含0.5%乳蛋白水解液中。一般每支拭子需保存1mL。
（二）食道—咽部分泌物（O-P液）的采集
被检动物在采样前禁食（可饮少量水）12小时，以免胃内容物反流污染O-P液。采样探杯在使用前经0.2%柠檬酸或2%氢氧化钠浸泡5min，再用洁净水冲洗。每采完一头动物，探杯要重复进行消毒并充分清洗。采样时动物站立保定，将探杯随吞咽动作送入食道上部10～15cm处，轻轻来回移动2～3次，然后将探杯拉出。将采集到的8～10mLO-P液倒入25mL以上的灭菌玻璃容器中，容器中应事先加有8～10mL细胞培养液（0.5%水解乳蛋白-Earle液）或磷酸缓冲液（0.04mol/L、pH值7.4），密封后充分摇匀后尽快冷冻保存，放冷藏箱及时送检，未能及时送检应置于-30℃冷冻保存。
· 血液样品的采集方法及技术要求
（一）采血种类
1.全血样品
使用全血样品进行血液学分析，细菌、病毒或原虫培养，样品中需加抗凝剂，抗凝剂一般用阿氏液。采血时可以直接将血液滴入抗凝剂中，并立即连续摇动使其充分混合；可以将血液放入装有玻璃珠的灭菌瓶内，震荡脱纤维蛋白；也可使用抗凝采血管，含有抗凝剂如乙二胺四乙酸（EDTA），直接采血。
2.血清样品
进行血清学试验通常用血清样品。用作血清样品的血液中不加抗凝剂，血液在室温下静置2～4小时（防止暴晒），待血液凝固，有血清析出时，用无菌剥离针剥离血凝块，然后置4℃冰箱过夜，待大部分血清析出后取出血清，必要时经低速离心分离出血清，在不影响检验要求原则下可根据需要加入适宜的防腐剂，做病毒中和试验的血清避免使用化学防腐剂（如硼酸、硫柳汞等）。若需长时间保存，则将血清置-20℃以下保存，且要尽量减少反复冻融。样品容器上贴详细标签。
3.血浆样品
可使用抗凝采血管，含有抗凝剂如EDTA，血液采完后，将试管颠倒几次，使血液与抗凝剂充分混合，然后静止，待细胞下沉后，上层即为血浆。
（二）采血方法
采集动物血液是动物疫病采样中一项重要内容，对疫病监测意义重大。采血过程中应严格保持无菌操作。采血前，应用酒精棉对采血部位局部消毒。采血完毕，局部消毒并用干棉球按压止血。采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥无菌。在采血、分离血清过程中，应避免溶血。
几种常用的动物主要采血方法介绍如下。
1.禽类（鸟）的采血方法
（1）心脏采血。①雏禽（鸟）心脏采血：左手抓禽（鸟），采样人员手持采血针，平行颈椎从胸腔前口插入回抽见有回血时，即把针芯向外拉使血液流入采血针。②成年禽心脏采血：成年禽只采血可取侧卧或仰卧保定。侧卧保定采血：助手抓住禽两翅及两腿，右侧卧保定，在触及心搏动明显处，或胸骨脊前端至背部下凹处连线的1／2处消毒，垂直或稍向前方刺入2～3cm，回抽见有回血时，即把针芯向外拉使血液流入采血针。仰卧保定采血：胸骨朝上，用手指压离嗉囊，露出胸前口，用装有长针头的注射器，将针头沿其锁骨俯角刺入，顺着体中线方向水平穿行，直到刺入心脏。
（2）翅静脉采血。在翅下静脉处消毒，手持采血针，从无血管处向翅静脉丛刺入，见有血液回流，即把针芯向外拉使血液流入采血针。也可保定禽只，使翅膀展开，露出腋窝部，拔掉羽毛，用消毒棉消毒。拇指压近心端，待血管怒张后，用装有细针头的注射器，由翼根向翅方向平行刺入静脉，放松对近心端的按压，缓慢抽取血液。采血完毕用棉球按压止血。
2.犬猫的采血方法
（1）股静脉采血法。麻醉并仰卧固定动物。用摸脉法在腹股沟找到股静脉，用手指按压静脉上部，使血管怒张，将针头刺入静脉内，有回血，则缓慢抽取所需量血液。
（2）桡头静脉采血。在前肢小腿前外侧剪毛，消毒，用橡皮管勒紧压迫或用手握紧前肢肘关节以上部位，可见桡骨前侧有充盈隆起的桡骨静脉。左手握紧或稍向下拉进针部位皮肤，使针穿刺皮肤不易活动。
（3）隐静脉采血。在后肢小腿外下1／3处，操作方法同桡头静脉采血，在隐静脉下端，针头向尾背侧方向刺入。此静脉较桡头静脉游动性大，因此，固定要牢固。
（4）颈静脉采血。将动物保定，稍抬头颈，于颈静脉沟上1／3与中1／3交界部剪毛消毒，一手拇指按压采血部位下方颈静脉沟血管，促使颈静脉怒张，另一手执针头，与皮肤呈45°角由下向上方刺入，血液顺器壁流入容器内，防止气泡产生。待血量达到要求后，拔下针头，用消毒棉球按压针眼，轻按止血。
3.猪的采血方法
（1）耳缘静脉采血。站立保定，助手用力在耳根捏压静脉的近心端，手指轻弹后，用酒精棉球反复涂擦耳静脉使血管怒张。沿血管刺入，见有血液回流，缓慢抽取所需量血液或接入真空采血管。用棉球按压止血。
（2）前腔静脉采血。可取站立或仰卧保定。①站立保定，保定器保定让猪头仰起，露出右腋窝，从右侧向心脏方向刺入，回抽见有回血时，即把针芯向外拉使血液流入采血针。②仰卧保定，把前肢向后方拉直。一般用装有20号针头的注射器采血，其穿刺部位在胸骨端与耳基部连线上胸骨端旁开2cm的凹陷处，向后内方与地面60°角刺入2～3cm，当进入约2cm时可一边刺入一边回抽针管内芯；刺入血管时即可见血进入针管内，采血完毕，局部消毒。
4.兔子的采血方法
（1）耳缘静脉采血。本法为最常用的取血法之一，常作多次反复取血用。将兔放入仅露出头部及两耳的固定盒中，或由助手以手扶住。选耳静脉清晰的耳朵，将耳静脉部位刮毛消毒。用手指轻轻摩擦兔耳，使静脉扩张，当静脉扩张后，将注射器或输液针的针头顺着血流方向插入静脉，即可缓慢回抽针栓抽取血液，或用连有5（1/2）号针头的注射器在耳缘静脉末端刺破血管待血液漏出取血，取血完毕用干棉球压迫止血。
（2）耳中央动脉采血。将兔置于兔固定筒内，在兔耳的中央有一条较粗、颜色较鲜红的中央动脉，用左手固定兔耳，右手取注射器，在中央动脉的末端，沿着动脉平行地向心方向刺入动脉，即可见动脉血进入针筒，取血完毕后注意压迫止血时间要稍长。但抽血时应注意，由于兔耳中央动脉容易发生痉挛性收缩，因此抽血前，必须先让兔耳充分充血，当动脉扩张，未发生痉挛性收缩之前立即进行抽血，如果等待时间过长，动脉经常会发生较长时间的痉挛性收缩。取血用的针头一般用6号针头，不要太细。针刺部位从中央动脉末端开始。不要在近耳根部取血，因耳根部软组织厚，血管位置略深，易刺透血管造成皮下出血。
（3）心脏采血。将家兔仰卧固定，在第三、四肋间胸骨左缘3mm处，用手触摸心脏搏动最强部位，剪毛消毒，将注射器针头由此部位垂直刺入心脏，兔子略有颤动，表明针头已穿入心脏，然后轻轻地抽取，如有回血，表明已插入心腔内，即可抽血；如无回血，可将枕头退回一些，重新插入心脏内，若有回血，按压心脏，缓慢抽取血量。注意事项有：①动作宜迅速，以缩短在心脏内的留针时间和防止血液凝固；②如针头已进入心脏但抽不出血时，应将针头稍微后退一点。③在胸腔内针头不应左右摆动以防止伤及心、肺一次可取血20～25mL。
（4）后肢胫部皮下静脉采血。将兔仰卧固定于兔固定板上，或由一人将兔固定好。在胫部上端股部扎以橡皮管，采血部位剪毛消毒，则在胫部外侧浅表皮下，可清楚见到皮下静脉。用左手两指固定好静脉，右手取带有5（1/2）号针头的注射器沿皮下静脉平行方向刺入血管，轻轻回抽注射器，如有回血，表示针头已刺入血管，即可取血。一次可取2～5mL。取完后必须用干纱布或干棉球压迫取血部位止血，时间要略长些，因此处不易止血。如止血不妥，可造成皮下血肿。
（5）股静脉采血。先将股静脉暴露，采血部位剪毛消毒，在近心端扎好止血带，或指压住近心端静脉血管，注射器在止血带下方，由远心端向心方向刺入血管，徐徐抽动针栓，见有回血，即可抽血。抽血完毕后用干纱布或干棉球轻压取血部位即可。若连续多次取血，取血部位宜尽量选择离心端。
（6）颈静脉采血。将兔固定在兔箱中，倒置使头朝下，在颈部上1/3的颈静脉部位剪毛消毒，采血部位剪毛消毒，暴露颈静脉，采血者未持注射器的拇指压住远心端颈静脉，使其怒张，注射器由近心端（距颈静脉分支2～3cm处）向头侧端顺血管平行方向刺入，使注射针一直引申至颈静脉分支叉处，即可采血。此处血管较粗，很容易取血，取血量也较多，一次可取10mL以上。取血完毕，拔出针头，用干纱布或干棉球轻轻压迫取血部位。
5.豚鼠（或龙猫）采血法
（1）耳缘剪口采血。将耳部消毒后，用锐器（刀或刀片）割破耳缘，在切口边缘涂抹20%柠檬酸钠溶液，阻止血凝，则血可自切口自动流出，进入盛器。操作时，使耳充血效果较好。此法能采血0.5mL左右。
（2）心脏采血。豚鼠身体较小，可由助手握住前后肢进行采血即可。针头宜选用稍细长些的，以免发生穿刺孔出血。通常在胸骨左缘的正中肋间，触摸心跳最明显的部位剪毛消毒，将注射器针头由此部位垂直刺入心脏，然后轻轻地抽取，如有回血，表明已插入心腔内，即可抽血；如无回血，可将枕头退回一些，重新插入心脏内，若有回血，缓慢抽取即可。
（3）股动脉采血。将豚鼠仰位固定在手术台上，剪去腹股沟部的毛，麻醉后，局部常规消毒。切开长2～3cm的皮肤，使股动脉暴露及分离。然后，用镊子提起股动脉，远端结扎，近端用止血钳夹住，在动脉中央剪一小孔，用无菌玻璃小导管或聚乙烯、聚四氟乙烯管插入，放开止血钳，血液即导管口流出。一次可采血10～20mL。
（4）背中足静脉取血。助手固定豚鼠，将其右或左膝关节伸直提到术者面前。术者将豚鼠脚背面常规消毒，找出背中足静脉后，以左手的拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手拿的注射针刺入静脉。拔针后立即出血，呈半球状隆起。采血后，用干纱布或干棉球压迫止血。
6.小白鼠采血
可以先麻醉，一般取其仰卧姿势，在其锁骨与剑突连线的中点沿胸骨左边缘进针5mm左右，边刺入边抽吸，即可采血。也可进行尾静脉采血，固定动物并露出鼠尾。将尾部浸在45℃左右的温水中数分钟，使尾部血管充盈。再将尾擦干，用锐器（刀或剪刀）割去尾尖0.3～0.5cm，让血液自由滴入盛器或用血红蛋白吸管吸取，采血结束，伤口消毒并按压止血。
7.龟的采血
健康龟最多可采血量一般是3mL/kg。
（1）颈静脉采血。颈右侧骨膜后。拉直头颈，暴露右侧颈部，按压颈根部，使血管鼓出，龟头部圆形骨膜可以帮助定位血管。消毒血管较突出处，进针颈静脉较靠近体表，如果未见血液，往后稍微退点针头，边扎边抽。抽完了棉签按压止血。
（2）枕骨下静脉采血。背中线，胸椎腹侧。把针头折弯约30°。把两前肢推向两侧甲桥。把头挤进壳，陆龟爱夹住双脚挡头，直接扎针，不用拔腿。消毒头顶中线上面对着皮肤和背甲连线处进针，注意针尖朝背甲。一边慢抽一边进针。
（3）尾静脉采血。尾巴背侧中线，脊柱和皮肤之间。拉直尾巴更好采血，缩着也可以。注意：陆龟尾巴皮肤粗糙难以彻底消毒，但又很容易脏，所以感染机会稍大，尤其注意多清洁多消毒。
（4）肱静脉采血。肘关节的屈面。拉出前肢，触诊肘关节的肌腱，在肌腱扎针，边扎边抽。注意：此种方法不适合1kg以下的龟。
（5）心脏采血。腹甲胸盾和腹盾的连接线和腹中线的交点。龟腹甲朝下，不然心脏远离腹甲，针采不到血。注意：适合软壳龟或者小于50g的龟，心脏注射非常疼痛，必要时要镇痛，8MHZ多普勒探头笔可以用来定位心脏。